تهیه ی کانژوگه پراکسیداز آنتی بادی مونوکلونال ضد igg مرغ و ارزیابی آن به وسیله الیزا
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده علوم
- نویسنده ندا مهرآور
- استاد راهنما مسعود رضا سیفی آباد شاپوری حسین معتمدی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1392
چکیده
میکروارگانیسم های بیماری زا از عوامل اصلی تلفات و خسارت های اقتصادی در صنعت طیور هستند. به دلیل تأثیر این عوامل بر صنعت طیور کیت های آزمایشگاهی مختلفی بر پایه الیزا برای تشخیص عفونت های حاصل از این عوامل طراحی شده اند. در این کیت ها اغلب از یک آنتی بادی ثانویه ی کانژوگه شده با آنزیم به منظور شناسایی igg مرغ استفاده می شود. هدف از مطالعه ی حاضر نشان دار کردن یک آنتی بادی مونوکلونال ضد igg مرغ با آنزیم پراکسیداز و ارزیابی آن در الیزای غیر مستقیم به عنوان آنتی بادی ثانویه می باشد. برای این منظور یک تیره سلول هیبریدومای تولید کننده ی آنتی بادی مونوکلونال (5b8) ضد igg مرغ در محیط rpmi 1640 کشت داده شده و مایع روی سلول ها جهت خالص سازی آنتی بادی 5b8 جمع آوری گردید. خالص سازی این آنتی-بادی از محیط کشت با استفاده از یک ستون حاوی سفارز حساس شده با igg مرغ انجام شد. برای آماده کردن این ستون ابتدا igg مرغ با استفاده از اسیدکاپریلیک و سولفات آمونیوم خالص سازی و نتیجه خالص سازی با استفاده از sds- page بررسی شد. سپس طبق روش های استاندارد igg خالص شده مرغ به رزین سفارز فعال شده با سیانور بروهیدرید اتصال داده شد. پس از خالص سازی آنتی بادی 5b8 با ستون سفارز، واکنش آنتی بادی خالص شده با igg مرغ در الیزای غیرمستقیم بررسی شد. براساس نتایج به دست آمده آنتی بادی مونوکلونال خالص شده تا رقت 204800/1 قادر به شناسایی igg مرغ با غلظت یک میکروگرم در حفره بود. پس از اطمینان از عملکرد آنتی بادی و نیز بررسی عاری بودن آن از آلودگی با igg مرغ (با آزمایش ایمونودات) واکنش کانژوگاسیون با آنزیم پراکسیدار به وسیله پریودات سدیم انجام گردید. عملکرد کانژوگه تهیه شده برای شناسایی igg مرغ در الیزای مستقیم مورد آزمایش قرار گرفت. نتایج نشان داد که کانژوگه تهیه شده تا رقت 32000/1 قادر به شناسایی igg مرغ با غلظت یک میکروگرم درحفره بود. در نهایت، توانایی کانژوگه ی پراکسیداز تجاری و تهیه شده برای شناسایی آنتی بادی های ضد نوکلئوپروتئین ویروس آنفلوآنزا در سرم مرغ های آلوده به ویروس آنفلوآنزا بررسی شد. od بدست آمده از آزمایش انتهایی همبستگی قوی و معناداری (r =0.95 ,p<0.001) را بین کانژوگه ی تجاری و تهیه شده نشان داد. در نتیجه از کانژوگه ی تهیه شده می توان برای طراحی کیت های تشخیصی سرم شناسی طیور استفاده نمود.
منابع مشابه
اندازه گیری ثابت تمایل (افینیتی) آنتی بادی مونوکلونال IgG ضد آنزیم الکالین فسفاتاز با استفاده از روش الیزا
Background and Aim: The affinity of an antibody with its antigen is a crucial parameter in its biological activity and carrying out immunologic tests such as radioimmunoassay (RIA) and immunohistochemistry. This study was done in our laboratory at Tarbiat Modarres University to measure the affinity constant of specific monoclonal antibodies/MAB (A1G8F7) with alkaline phosphatase enzyme produced...
متن کاملاندازه گیری ثابت تمایل (افینیتی) آنتی بادی مونوکلونال igg ضد آنزیم الکالین فسفاتاز با استفاده از روش الیزا
زمینه و هدف: افینیتی آنتی بادی به آنتی ژن در بسیاری از موارد تاثیر بیولوژیکی مهمی در فعالیت آن آنتی بادی و همچنین در انجام سنجشهای آزمایشگاهی ایمونولوژیکی مانند رادیوایمونواسی (ria) و ایمونوهیستوشیمی دارد. مطالعه حاضر با هدف سنجش افینیتی آنتی بادی مونوکلونال محصول کلون هیبریدومای a1g8f7 تولید شده نسبت به آنزیم آلکالین فسفاتاز (alp) انجام گردید.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، روشهای متعددی برای ...
متن کاملتهیه و ارزیابی آنتی بادی ضد igg گاو با استفاده از پروتئین نوترکیب ناحیه ثابت زنجیر سنگین igg گاو
anti-bovine (پادتن ضد پادتن گاو) در آزمایش های سرمی کاربرد زیادی دارد که برای تهیه آن به طور معمول پادتن خالص شده گاو به گونه دیگری(گوسفند، خرگوش و غیره) تزریق می گردد. در این مطالعه تلاش گردید با تغییر میزبان، طول زمان و درجه حرارت کشت، بهترین شرایط بیان پروتئین نوترکیب ناحیه ثابت زنجیر سنگین igg گاو برآورد گردد، سپس پروتئین فیوژن تولید شده در شرایط بهینه با استفاده از روش کروماتوگرافی خالص سا...
15 صفحه اولبررسی حساسیت نسبی کیت های نسل سوم سنجش آنتی بادی ضد ویروس هپاتیت C به روش الیزا: ارزیابی 20 کیت
چکید ه سابقه و هدف مهم‌ترین چالش برای انتخاب کیت‌های سنجش آنتی بادی ضد ویروس هپاتیت C ، حساسیت آن است. در این مطالعـه20 کیت (با روش الیزا) با یکدیگـر و با کیت مرجـع مطـابق با توصیـه سـازمـان جهانـی بهـداشتAnti-HCV 3.0 Enhanced SAVE) محصول کمپانی ارتو) مقایسه گردیدند. مواد و روش‌ها مطالعه انجام شده از نوع تشخیصی بوده و20 کیت به وسیله 3 تا 4 پانل دگرگونی سرمی و 2 تا 3 پانل سطح کارآیی مو...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه شهید چمران اهواز - دانشکده علوم
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023